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非羟基化碳链长度增加的 (S)-,-二羟基酮和在型和除FI和之外的突变体中表现出低于的活性。TKgst对的活性为型的倍,这是由于Ile代替Phe,允许与的C相互作用(图)。离ThDP活性中心太远的其他残基的突变没有增强活性。较长碳链的(S)-,-羟基酮和没有获得活性或活性非常低,这可能是因为目标残基的稳定性差和与化合物-相比溶解度较低。
结果没有观察到产物的TKgst突变体文库的形成,但观察到具有几种TKgst突变体裂解物(SI) 的产物。文库HLHSLX 提供了多数量的活性TKgst突变体。基于这些结果,对个命中进行了测序,其中个显示Ile代替了Leu。Ile诱导了一个新的ThDP位置,有利于与HL的相互作用(图)。 为了进一步改进,创建另一个库,保留LI和HL,并通过SSM在H位置上创建多样性,希望用非极性残基代替Ser。
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