为什么有的共定位图片中叶绿体通道是玫红色？
在拟南芥、、玉米、大麦、小麦等材料中，种植培养苗子时是正常接受光照的，叶片中含有大量叶绿体，而叶绿素在640nm左右的激发光下可产生红色的自发荧光。当在这些含叶绿体较多的受体材料中做共定位实验时，共定位marker一般为红色荧光（在560nm左右的激发光下），实验及共聚焦拍摄时两个波长通道的荧光互不影响，但视野下看着比较混淆，尤其叠加后二者不易分清，因此只是在颜色显示上将叶绿体自发荧光设置为玫红色，以显示和共定位marker的区别。
亚细胞定位操作步骤
1、通过一些在线网站预测亚细胞定位
2、亚细胞定位载体构建
（1）引物设计：利用引物设计软件，根据pEGP-MCS-N1或pEGP-C1-MCS的酶切位点设计目的基因引物。
（2）载体构建：将PCR产物酶切后插入pEGP-MCS-N1或pEF-C1-MCS，得到表达目的基因与EGP融合蛋白质的真核表达载体。
3、细胞转染
当细胞生长到对数生长期时，接种到共聚焦显微镜的玻璃底培养皿（35mm petri dish，荧光定量，10 mm Microwell）中，培养过夜。当细胞贴壁率达到30%~50%时，将融合绿色荧光蛋白GFP的重组载体质粒和目标细胞器质粒共转染细胞。37℃孵箱培养24~72h。
4、激光扫描共聚焦显微镜观察
将上述细胞分别在24、36、48、72h的时间点，根据实验需求选择对应激发波长（常用405nm、488nm和561nm），使用共聚焦显微镜观察，采取图像。
蛋白亚细胞定位是指对蛋白质在细胞内的具体位置进行分析和预测，对于理解蛋白质的功能和作用机制具有重要意义。随着生物信息学和蛋白质组学的发展，越来越多的研究机构和实验室开始提供蛋白亚细胞定位的分析和预测服务。
蛋白亚细胞定位的方法通常分为基于实验的方法和基于计算的方法。基于实验的方法通常使用荧光、荧光共振能量转移等技术来观察蛋白质在细胞内的位置，但是这种方法需要耗费时间和人力，且实验结果可能受到多种因素的影响。基于计算的方法则利用已知的蛋白质序列和数据库中的信息来预测蛋白质的位置，这种方法具有快速、、可重复性高等优点，但是预测结果的准确性可能会受到数据质量和模型准确性的影响。
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