





原位杂交杂交液注意事项:
(1)杂交液内除含一定浓度的标记探针外,染色体原位杂交技术服务,还含有较高浓度的盐类、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛血1清白蛋白及载体DNA或RNA等。
(2)杂交液中含有较高浓度的Na+可使杂交率增加,可以减低探针与组织标本之间的静电结合。甲酰胺可使Tm降低,杂交液中含每1%的甲酰胺可分别使RNA:RNA,RNA:DNA,DNA:DNA的杂交温度降低0.35℃,0.5℃和0.65℃。,所以杂交液中加入适量的甲酰胺,可避免因杂交温度过高而引起的组织形态结构的破坏以及标本的脱落。硫酸葡聚糖能与水结合,从而减少杂交液的有效容积,提高探针有效浓度,以达到提高杂交率的目的(尤其对双链核酸探针)。
在杂交液中加入牛血1清白蛋白及载体DNA或RNA等,都是为了阻断探针与组织结构成分之间的非特异性结合,以减低背景。

分子病理学在蛋白质和核酸等生物大分子水平上,应用分子生物学理论、技术及方法研究疾病发生L发展的过程,从而为传统的病理学注入了生机。在如今的临床病理诊断过程中,运用核酸原位杂交、PCR技术、免1疫荧光、免1疫组织化学染色等技术,能够更加深化对疾病的本质认识,对于肿1瘤的诊断和治1疗也有着临床的指导意义。分子病理学诊断主要应用于以下几个方面:1、对于肿1瘤易感基因的检测,对于肿1瘤高危人群的筛检具有实用价值,如检测GSTπ基因以判定个体暴露于致癌物是的致癌危险性。2、肿1瘤相关病毒的检测,如采用原位杂交方法检测标本中HPV、EBER等病毒。

1,组化
实验原理:组化(IHC),是应用抗原与特异性结合的原理,通过酶标与底物反应显色,从而对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量的研究,称为组织化学技术。组化(IHC)具有特异性强、敏感度高、定位准确的优点。
1, 荧光
实验原理:荧光(IF),是应用抗原与特异性结合的原理,通过荧光标记对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量的研究。目前皮诺飞生物主要可以对石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片、组织芯片进行荧光检测。皮诺飞生物目前已突破传统的荧光双标限制,开发出多色荧光技术(多可达7色)。
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