原理简介
GFP、RFP等荧光蛋白因其的荧光性质和灵敏性,免疫蛋白荧光定位,常作为报告基因研究并分析基因产物在细胞中的定位和相互作用等。将目标蛋白与荧光蛋白的N端或者C端融合,通过瞬时转化技术或稳定遗传转化技术,使得该融合蛋白在受体材料细胞内表达,目标蛋白会牵引荧光蛋白一起定位到目标细胞器,通过显微镜观察荧光蛋白在细胞内显示的位置,确定目标蛋白的位置,从而确定目标蛋白的亚细胞定位情况。
为什么不先对基因做预测,在预测的结果上直接做共定位?
不同的预测网站有不同的计算方法,同一个基因在不同的预测网站也可能得出不同的定位结果。另外所有的结果都应是基于实验得到的,对于不清楚可能定位在哪里的基因,一般推荐先做普通定位,根据普通定位的结果再决定做哪种细胞器的共定位。
适用于什么实验场景?
(1)基因功能研究,文章里总少不了这一项。
(2)研究蛋白相互作用,与酵母双杂实验结果相互验证。
亚细胞定位的应用疾病机制研究:通过对疾病发生过程中关键蛋白质的亚细胞定位,有助于深入了解疾病的发生机制,为新药研发提供靶点。
筛选:利用亚细胞定位技术,可以在大规模筛选中快速鉴定对特定亚细胞结构的影响,从而加速研发过程。生物医学研究:在神经科学、学、学等生物医学领域,亚细胞定位技术广泛应用于基础研究和诊断方法的开发。
临床诊断:通过对生物样本的亚细胞定位分析,有助于疾病的早期诊断和预后评估。例如,通过对组织中特定蛋白质的表达和分布进行分析,有助于判断的性质和程度。
基因编辑:利用CRISPR-Cas9等基因编辑技术,可以地敲除或插入特定基因,从而改变蛋白质的亚细胞定位,进一步研究其对细胞功能的影响。
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