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武汉贝科新肽科技有限公司

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武汉贝科新肽科技有限公司前身为武汉思特进科技发展有限公司,武汉贝科新肽科技有限公司,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接、中药草种植研发为一体的高新技术公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、中药草种植基地、原核蛋白表达平台、日化产品生产平台;......

武汉贝科新肽公司-染色体原位杂交

产品编号:100107117837                    更新时间:2024-12-22
价格: 来电议定
武汉贝科新肽科技有限公司

武汉贝科新肽科技有限公司

  • 主营业务:原位杂交,亚细胞**,蛋白互作,启动子筛选
  • 公司官网:bkxtbio.com.cn
  • 公司地址:湖北省武汉市洪山区关山大道289号紫菘逸景华庭二期109栋2层2002-3号

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原位杂交(In situ hybridazation)

固定

收集斑马鱼的胚胎,在Holfretor水中培养,到达所需要的发育时期时,用蛋白酶去除卵膜,染色体原位杂交,用4%多聚甲醛固定,在4℃保存,二十四小时后用50%2%多聚甲醛溶液洗,然后换成,在-20C 保存,待用(两天和两天以上的胚胎需要用处理,去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培养,可阻断色素的形成)






DNA 探针为原位杂交提供较高的灵敏度。与RNA探针相比,DNA探针与靶mRNA 分子的杂交强度较弱,因此在杂交后的洗涤中不应使用甲醛。

探针特异性至关重要。如果已知细胞中mRNA或DNA的确切核苷酸序列,则可据此设计高度的互补探针。如果超过 5% 的碱基对不互补,那么探针只能与靶序列发生轻度杂交。这意味着,探针更容易在洗涤和检测步骤中被洗去,可能无法正确检测。





将32 P标记的双链DNA探针于100℃加热5分钟,迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间,盛滤膜的容器应盖严,以防液体蒸发。

杂交结束后,去除杂交液,立即于室温把滤膜放入大体积(300-500ml)的2×SSC和0.1% SDS溶液中,轻轻振摇5分钟,并将滤膜至少翻转一次。重复洗 一次,同时应避免膜干涸。

68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜两次,每次1-1.5小时。此时已可进行自显影。如背景很高或实验要求严格的洗膜条件,可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃将滤膜浸泡60分钟。




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