





据国际细胞外囊泡学会(ISEV)在2014年的提议,外泌体鉴定3个标志:透射电镜(transmission electron microscope,TEM)、粒径(Nanoparticle Tracking Analysis, NTA)、蛋白标志物(Western Blot, WB)。
外泌体透射电镜TEM鉴定外泌体大小、形态,判断样本是否含有外泌体。
外泌体透射电镜分辨率为0.1~0.2nm,适合外泌体双层囊膜超微结构观察,可观测样本中是否存在外泌体样结构(通常为茶托型或一侧凹陷的半球形),同时可测量外泌体大小。
检测平台:TecnaiTM G2 Spirit BioTWIN
检测结果:三张透射电镜图片,外泌体电镜测试服务,尽可能体现完整的外泌体形态(如有)
检测周期:10-15个工作日

外泌体可通过多种小分子进行修饰,因此逐渐成为递送治1疗药1物的有效载体。研究发现,GRP78 在索拉菲尼耐药癌细胞中,相对于索拉菲尼敏感癌细胞中显著过表达,外泌体电镜技术服务,因此,可能是 HCC 治1疗的潜在靶点。
在这项研究中,锦州医学院赵亮课题组通过修饰 BM-MSCs 以表达外泌体 siGRP78,证明了 siGRP78 修饰的外泌体与索拉1非尼联合能够靶向肝细胞癌细胞中的 GRP78 并抑制其生长和体外癌细胞的侵袭。此外,siGRP78 修饰外泌体与索拉1非尼联合也抑制体内癌细胞的生长和转移。证明了 siGRP78 修饰的外泌体可以使索拉1非尼耐药的癌细胞对索拉1非尼敏感并逆转耐药性。

NTA可以提供样本中颗粒的粒径分布和绝1对浓度,但不能够以NTA所提供的浓度数值这个单一的指标来定量外泌体。首先,我们必须理解NTA检测原理:该技术基于布朗运动,通过视频分析颗粒计数,可同时获取样本中颗粒的粒径和绝1对浓度。
因此,外泌体电镜,样本中的所有颗粒,都会被侦测并计入,而不能筛选出外泌体单独进行计数;同理:也不能通过NTA所提供的粒径分布情况这个单一的指标判断所提取出的内容物就是外泌体;例如下图为常见的粒径浓度分布图,可以说明所提取的内容物是在外泌体粒径范围内,但是否为外泌体还需要结合其他方法综合验证,譬如:透射电镜、western blot等。

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