






植物组织原位杂交的步骤包括以下几个方面:
1. 制备组织样品:从植物中取出需要研究的组织样品,如根、茎、叶等。
2. 固定组织样品:将组织样品固定在载玻片上,通常使用或乙醇等化学物质进行固定。
3. 处理组织样品:对固定的组织样品进行脱水、透明化、脱脂等处理,以便于DNA探针的穿透和结合。
4. 制备DNA探针:根据需要研究的基因序列,设计并合成DNA探针。DNA探针可以标记荧光染料或性同位素,以便于检测。
5. 杂交DNA探针:将DNA探针与组织样品进行杂交,通常需要在高温下进行,以便于DNA探针与RNA或DNA结合。
6. 检测杂交信号:通过荧光显微镜或计数器等设备,检测DNA探针与RNA或DNA的结合情况,确定目标基因的表达模式和位置。

FISH是原位杂交技术大家族中的一员,因其所用探针被荧光物质标记(间接或直接)而得名,该方法在80年代末 被发明,现已从实验室逐步进入临床诊断领域。基本原理是荧光标记的核酸探针在变性后与已变性的靶核酸在退火 温度下复性;通过荧光显微镜观察荧光信号可在不改变被分析对象(即维持其原位)的前提下对靶核酸进行分析。DNA荧光标记探针是其中常用的一类核酸探针。利用此探针可对组织、细胞或染色体中的DNA进行染色体及基因水平 的分析。荧光标记探针不对环境构成污染,灵敏度能得到保障,可进行多色观察分析,因而可同时使用多个探针,GISH,缩 短因单个探针分开使用导致的周期过程和技术障碍。

在研究DNA分子原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,能过氢键结合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 双键分子的特点,应用带有标记的(有性同位素,如3H、35S、32P、荧光素生物素、等非性物质)DNA或RNA片段作为核酸探针,与组织切片或细胞内待测核酸(RNA或DNA)片段进行杂交,然后可用自显影等方法予以显示,在光镜或电镜下观察目的 mRNA或DNA 的存在并定位

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