原位杂交杂交液
（一）杂交液内除含一定浓度的标记探针外，还含有较高浓度的盐类、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛白蛋白及载体DNA或RNA等。
（二）杂交液中含有较高浓度的Na+可使杂交率增加，可以减低探针与组织标本之间的静电结合。
（三）贾酰胺可使杂交温度降低，所以杂交液中加入适量的甲酰胺，可避免因杂交温度过高而引起的组织形态结构的破坏以及标本的脱落。
（四）硫酸葡聚糖能与水结合，从而减少杂交液的有效容积，提高探针有效浓度，以达到提高杂交率的目的。
原位杂交第二天
1.
1）将探针回收，放于－20C保存(通常探针可重复使用十次左右)。
2）加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，荧光原位杂交，60℃，放置30分钟，重复一次。
3）置换2XSSCT1ml，60℃，放置15分钟。
4）置换0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分钟，重复一次。
2.
1）用MABT洗两次，每次五分钟，放在摇床轻轻摇动。
2）室温下加1ml 1：2：7溶液，时间为一小时。
3）按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶连，4C 冰箱过夜。
怎样保证原位杂交实验操作时的温度?
建议仪器操作，人工操作的话要注意：
（1）对荧光原位杂交操作过程中可能使用的一些仪器进行温控检查，不符合要求的进行更换。
（2）尽可能地保持环境温度在20度以上。
（3）针对需要预热以达到要求温度的试剂，在使用前必须使用温度计对其进行测温。
（4）同时检测的样本不超过4块，操作一定要迅速，实验人员要注意一些小部件的温度，尤其是在冬季。
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