染色体原位杂交-湖北原位杂交-武汉贝科新肽科技公司(查看)

将32 P标记的双链DNA探针于100℃加热5分钟，迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间，湖北原位杂交，盛滤膜的容器应盖严，原位杂交服务，以防液体蒸发。

杂交结束后，染色体原位杂交，去除杂交液，植物原位杂交，立即于室温把滤膜放入大体积（300-500ml）的2×SSC和0.1% SDS溶液中，轻轻振摇5分钟，并将滤膜至少翻转一次。重复洗 一次，同时应避免膜干涸。

68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜两次，每次1-1.5小时。此时已可进行自显影。如背景很高或实验要求严格的洗膜条件，可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃将滤膜浸泡60分钟。

原位杂交技术在许多领域都有应用，以下是其中几个具体应用：

细胞生物学和发育生物学：在细胞生物学和发育生物学领域，原位杂交技术常被用于研究基因的表达和定位。例如，通过标记特定基因的探针，可以在细胞或组织中检测特定基因序列的存在和分布，进而了解基因在细胞分化、发育和功能中的作用。

基因组学和遗传学研究：原位杂交技术也可用于基因组学和遗传学研究。例如，通过标记多个基因探针，可以检测基因组中的多个基因序列，从而进行基因定位、基因表达谱分析、基因突变检测等研究。

病毒学和病原微生物研究：在病毒学和病原微生物学领域，原位杂交技术常被用于检测和定位病毒、细菌等病原微生物。例如，通过标记特异性或核酸探针，可以检测组织中病原微生物的存在、情况以及分布特征，从而为疾病的预防、诊断和提供依据。

总之，原位杂交技术在生物学、医学、基因组学、遗传学、病毒学和病原微生物学等领域都有广泛的应用价值，为人类认识生命现象、探究疾病机制和提供了有力的技术支持。

以菌落原位杂交为例：对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落（100-200）进行筛选时，可采用该方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张纤维素滤膜上。经培养一段时间后，对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。

将少数菌落转移到纤维素滤膜上

（1） 在含有选择性的琼脂平板上放一张纤维素滤膜。

（2） 用无菌牙签将各个菌落先转移至滤膜上，再转移至含有选择性但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种（或打点）。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。后，在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒的菌落。

（3） 倒置平板，于37℃培养至划线的细菌菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。

（4） 用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂，在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。

（5） 用Parafilm膜封好主平板，倒置贮放于4℃，直至获得杂交反应的结果。

（6） 裂解细菌，按本段下面所述方法，使释放的DNA结合于纤维素滤膜。