






基因法转化洋葱表皮细胞:
分别用70%乙醇和灭菌蒸馏水清洗金粉(直径为1 μm),加入灭菌蒸馏水制成金粉悬浮液,取100 μL 放在含有1.0 cm2 洋葱表皮的玻璃皿中,边振荡边加入10 μL pCambia2301-GaMYB2-GFP质粒,BIFC,逐步加入40 μL 0.1 mol·L-1 亚精胺和100 μL2.5 mol·L-1 CaCl2,振荡混匀。基因GDS-80轰击时氦气罐的气压为1 300 psi,取10 μL DNA 包裹好的微粒悬浮液加到基因中央,进行轰击,之后放置25℃避光过夜培养,使用ConfocalLaser激光共聚焦显微镜观察。
相关数据库
SUBA:主要聚焦于植物蛋白质的亚细胞定位信息,为研究植物细胞内蛋白质的分布和功能提供了丰富的数据资源。
Cell-PLoc:提供了多种生物蛋白质亚细胞定位的预测和注释信息,涵盖了细菌、真菌、动物和植物等多个物种。
Human Protein Atlas:专注于人类蛋白质的亚细胞定位数据,通过多种实验技术和方法,系统地对人类蛋白质在细胞内的位置进行了标注和展示。

GaMYB2 在洋葱表皮细胞中的瞬时表达分析:采用基因轰击的方法,用包裹质粒的金粉对洋葱表皮进行轰击,暗培养过夜后,在激光共聚焦显微镜下进行观察,从图A 中可以看出对照GFP空载体在整个洋葱细胞均能看到绿色荧光,为组成型表达;从图B 中发现GaMYB2-GFP 的融合表达载体只能在细胞核中能看到绿色荧光,这进一步证明该蛋白不具有跨膜蛋白结构,定位在细胞核中,具有转录因子的一般特征。

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